ClpP是原核和真核生物中高度保守的ATP依賴的絲氨酸水解酶，負責調控蛋白質穩(wěn)態(tài)。生理狀態(tài)下，ClpP通過與伴侶蛋白（如ClpX形成ClpXP復合體）發(fā)揮水解酪蛋白的功能。小分子激動金黃色葡萄球菌ClpP(SaClpP)異常降解關鍵蛋白質，是抗生素發(fā)現(xiàn)的新策略。由于異常激活人源ClpP (HsClpP)可引起線粒體蛋白穩(wěn)態(tài)失調從而產生細胞毒性，因此，理想的靶向性激動SaClpP的抗生素研究必須充分避免對線粒體HsClpP產生干擾。然而，目前尚未見選擇性的SaClpP激動劑被報道。11月14日，中國科學院上海藥物研究所楊財廣課題組在《自然-通訊》（Nature Communications）上，在線發(fā)表了題為Anti-infective therapy using species-specific activators of Staphylococcus aureus ClpP的研究論文。

　　該研究利用高通量篩選發(fā)現(xiàn)Wnt信號通路抑制劑ICG-001可激動兩種ClpP的酶活。通過對ICG-001進行結構優(yōu)化，研究實現(xiàn)了一類新骨架ClpP激動劑ZG111通過引起線粒體蛋白穩(wěn)態(tài)失調抗胰腺癌（Cell Chemical Biology, 2022, 29, 1396）。在構效關系研究基礎上，研究獲得了ZG111的衍生物ZG180，這對兩種ClpP的激動活性均顯著提高?？蒲腥藛T在解析ZG180結合SaClpP與HsClpP的復合物晶體以及對比分析SaClpP與HsClpP蛋白序列中發(fā)現(xiàn)，ZG180在SaClpP蛋白結合口袋處的91位異亮氨酸與HsClpP的同源位置146位色氨酸在空間上具有較大差異。研究人員基于結構差異進一步開展設計，在ZG180中引入手性的甲基取代，得到(R)-和(S)-ZG197。生化實驗表明，(R)-和(S)-ZG197可以選擇性結合并激動SaClpP，而對HsClpP無明顯激動活性。為此，該研究嘗試解釋(R)-和(S)-ZG197選擇性的作用機制。研究發(fā)現(xiàn)，(S)-ZG197對SaClpPI91W突變體的作用減弱，而針對HsClpP的W146A突變則提高了(R)-ZG197的活性；HsClpP中存在著一個較長的C末端基序，而這個序列在SaClpP及其他原核生物的ClpP中缺失。去掉C端的HsClpP后(R)-ZG197的活性提高，而HsClpPW146A及其與C末端基序的聯(lián)合作用可使(R)-和(S)-ZG197活性增強。

　　研究在細菌水平上進一步評價兩個化合物的抗菌效果發(fā)現(xiàn)，(R)-和(S)-ZG197可以有效抑制臨床多藥耐藥菌；體外殺菌實驗也證實了(R)-和(S)-ZG197可以在6h內有效清除病原菌；同時，與傳統(tǒng)抗生素利福平等聯(lián)用，可殺死造成慢性感染的持留菌。研究基于斑馬魚和小鼠動物模型發(fā)現(xiàn)，(R)-和(S)-ZG197對耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）感染斑馬魚有顯著的治療作用，且在小鼠皮膚感染模型上可顯著降低皮膚表面的細菌載量，從而有效抑制MRSA感染。

　　該研究獲得了兩個選擇性作用于SaClpP而不影響HsClpP的小分子激動劑，揭示了實現(xiàn)選擇性作用的機制，并從概念上驗證了針對兩種種屬同源性較強的ClpP蛋白可以實現(xiàn)選擇性激活。此外，該工作為治療MRSA感染提供了可能，并推動了新靶點抗生素藥物的發(fā)現(xiàn)。研究工作得到國家自然科學基金的資助，并獲得上海科技大學季泉江課題組、同濟大學附屬東方醫(yī)院吳文娟課題組、上海藥物所藍樂夫課題組、復旦大學甘建華課題組，以及上海同步輻射光源、上海公共衛(wèi)生臨床中心、上海藥物所先導專項化合物資源庫的支持。中國科學院大學杭州高等研究院科研人員參與研究。

　　論文鏈接

小分子選擇性激動金黃色葡萄球菌ClpP抗耐藥菌感染

來源： 上海藥物研究所