9 月 8 日晚，國家藥品監(jiān)督管理局藥品審評中心（CDE）發(fā)文就《先進治療藥品溝通交流中 I 類會議申請及管理工作細則》征求意見。這一意見旨在優(yōu)化先進治療藥品（ATMPs）的溝通交流流程，顯著縮短審評對話周期，推動細胞與基因治療等創(chuàng)新藥品早日上市。

細則關(guān)鍵內(nèi)容顯示，只要滿足下列任一條件，可直接按 I 類會議管理，加快溝通效率，縮短溝通時限為 30 日：1、已納入突破性治療藥物程序的 ATMPs；2、針對基因突變/缺陷等導(dǎo)致的相關(guān)疾病，可對病因進行治療的基因治療產(chǎn)品；3、完成探索性臨床試驗后，申請關(guān)鍵性/確證性臨床試驗啟動前、關(guān)鍵性/確證性臨床試驗期間、以及新藥上市許可申請前溝通交流會議的 ATMPs。

細則強調(diào)，與現(xiàn)行《藥物研發(fā)與技術(shù)審評溝通交流管理辦法》（2020 年第 48 號）銜接，未新增企業(yè)負擔(dān)。業(yè)內(nèi)專家指出，這一最新細則直擊 ATMPs 研發(fā)痛點：基因治療、細胞治療產(chǎn)品常因技術(shù)新穎性面臨溝通效率瓶頸。通過將關(guān)鍵節(jié)點溝通納入快速通道，有望壓縮研發(fā)周期 6-12 個月，推動我國先進療法與國際同步

▲ 2013-2023 年，Emily 往年「打卡照」

（2024 年起，Emily 表示不再更新打卡照）

眾所周知，曾身患絕癥的女孩 Emily 在 CAR-T 細胞治療下實現(xiàn)治愈，迄今無癌生存 13 年。在我國，當(dāng)下也已有共 7 款?CAR-T?細胞治療產(chǎn)品獲批上市，其中傳奇生物的西達基奧侖賽更是率先出海美國，今年上半年銷售額已達 8.08 億美元，成為行業(yè)熟知的重磅炸彈藥物將是板上釘釘?shù)氖?。那么后來者如何切入這樣一個極具前景的賽道？這個賽道又有哪些技術(shù)瓶頸和挑戰(zhàn)呢？

由于 CAR-T 細胞具有獨特生物學(xué)特性的活細胞，不完全受我們控制，被稱為「活藥物」。其在制造過程需要額外的監(jiān)督和嚴格控制，以確保細胞的安全和有效。 CAR-T 細胞制造的精細過程始于從患者血液中提取 T 細胞。CAR 基因通過病毒載體、轉(zhuǎn)座子系統(tǒng)或直接 mRNA 轉(zhuǎn)導(dǎo)傳遞給這些細胞。最終產(chǎn)生的 CAR 蛋白在細胞表面得到表達。最后，CAR-T 細胞在生物反應(yīng)器中擴增（繁殖），然后準備回輸?shù)交颊唧w內(nèi)。

質(zhì)量控制

由于 T 細胞是活體的，CAR-T 細胞開發(fā)者們依賴生物過程來構(gòu)建它們。因此，開發(fā)者必須執(zhí)行幾個質(zhì)量控制（QC）步驟，以確保這些細胞療法的功能和安全性。

首先，在轉(zhuǎn)染過程中，CAR 基因?qū)㈦S機整合到 T 細胞基因組的不同位置。這個過程必須密切監(jiān)測。如果轉(zhuǎn)基因整合到基因組的非編碼區(qū)域，它將永遠不會表達。該基因還可能干擾癌基因并促進腫瘤生長。

此外，制造商需要精確控制每個 T 細胞中的轉(zhuǎn)基因拷貝（copies）數(shù)。CAR 拷貝數(shù)過低，表示 CAR 表達量不足，T 細胞無法有效識別并殺傷腫瘤細胞，導(dǎo)致治療無效；CAR 拷貝數(shù)過高，可能引發(fā) T 細胞過度激活，導(dǎo)致細胞耗竭或過早死亡，縮短其在體內(nèi)的存活時間，降低長期療效。甚至引發(fā)全身性炎癥反應(yīng)（CRS），導(dǎo)致器官損傷和死亡。因此為了確保患者的安全和藥物的療效，監(jiān)測 CAR 基因的拷貝數(shù)以及轉(zhuǎn)基因整合到患者 T 細胞中的位置對于 CAR-T 細胞制造商至關(guān)重要。

美國 FDA 建議，對于使用逆轉(zhuǎn)錄病毒或慢病毒載體的細胞療法，每個基因組中應(yīng)≤5 個拷貝/細胞，以減輕由插入性誘變引起的臨床風(fēng)險。較高的拷貝數(shù)可能導(dǎo)致 CAR-T 細胞對患者產(chǎn)生毒性作用。

再者，通過檢測回輸前細胞的 CAR 拷貝數(shù)，可以預(yù)估體內(nèi)擴增潛力，優(yōu)化細胞劑量。同時，在治療開始后，通過追蹤 CAR 拷貝數(shù)變化，評估細胞在體內(nèi)的持久性和擴增狀態(tài)，為后續(xù)治療提供依據(jù)。

分析方法

科學(xué)家通常使用定量聚合酶鏈式反應(yīng)（qPCR）來計算 CAR 基因整合。然而，qPCR 只能產(chǎn)生相對的定量結(jié)果，需要一個標(biāo)準曲線進行比較。為了制作標(biāo)準曲線，生物制造商需要對標(biāo)準樣品進行連續(xù)稀釋，這是一個耗時、復(fù)雜的過程，往往成為實驗差異性的根源。此外，qPCR 不能檢測每個細胞中單個拷貝的整合；它的靈敏度限制在每個細胞至少有兩個或三個拷貝。

而另一種更靈敏的定量 CAR 基因拷貝數(shù)的方法是 Droplet Digital PCR（微滴式數(shù)字 PCR，ddPCR）分析。qPCR 和 ddPCR 的原理相似，均使用標(biāo)準試劑、引物和探針。然而，qPCR 每管只能執(zhí)行一個 PCR 反應(yīng)，而 ddPCR 技術(shù)涉及將樣本分成數(shù)萬納米升大小的液滴，每一個液滴中都獨立進行 PCR 擴增。如果液滴中包含目標(biāo)序列（CAR 轉(zhuǎn)基因），那么它將被擴增，熒光探針將發(fā)出可檢測的信號。是否可被檢測的結(jié)果將被收集起來，最終比 qPCR 提供更精確的定量結(jié)果。通過計算含有轉(zhuǎn)基因的液滴百分比，科學(xué)家可以確定樣品中該基因的濃度，并從中得出 T 細胞基因組中該基因的平均拷貝數(shù)。

主要優(yōu)勢：

1. 無需標(biāo)準品（標(biāo)準曲線），對靶標(biāo)分子實現(xiàn)絕對定量；

2. 可以實現(xiàn) 0.01% 或以上的突變檢出率，更高的靈敏度；

3. 有效區(qū)分濃度差異（變化）微小的樣品，更高的精密度和重復(fù)性；

4. 不依賴擴增效率，能克服 PCR 抑制劑的影響，特別適合基質(zhì)復(fù)雜樣本的檢測；

5. 操作過程和結(jié)果分析簡單。

ddPCR 技術(shù)流程：

ddPCR 不僅用于 CAR-T 細胞制造和安全性測試的上述領(lǐng)域，還可用于監(jiān)測經(jīng)過基因工程改造的細胞的持久性和活性，解決對細胞安全性的擔(dān)憂。

例如，F(xiàn)DA 擔(dān)憂 CAR-T 細胞的復(fù)制可能導(dǎo)致患者體內(nèi)形成快速進展的 T 細胞腫瘤。為確保安全，F(xiàn)DA 建議科學(xué)家測試臨床批次、細胞產(chǎn)品及 CAR-T 治療患者的血液。

ddPCR 可檢測 CAR-T 細胞中的復(fù)制病毒，篩選受感染細胞，并檢測其他微生物污染來源。 ddPCR 還可用于檢測 CAR-T 細胞在患者治療后的持久性。這些細胞應(yīng)在人體內(nèi)存活數(shù)月。若存活時間不足，療效有限；若持續(xù)過久，可能產(chǎn)生不良副作用。病理學(xué)家可利用 ddPCR 定期監(jiān)測血液中的 CAR-T 細胞計數(shù)，跟蹤細胞的持久性。

總的來說，ddPCR 可以協(xié)助確保 T 細胞含有正確數(shù)量的 CAR 基因拷貝，從而使治療安全有效。未來 ddPCR 將可能進入更多的臨床實驗室，幫助改善 CAR-T 細胞治療的多個方面，并幫助其在未來的個性化癌癥治療中提供更準確和有效的治療方案。

在最為知名的 CAR-T 細胞檢測之外，ddPCR 技術(shù)還在 AAV 基因療法、質(zhì)粒、活菌和 mRNA 等產(chǎn)品的質(zhì)量分析中也扮演著非常重要的角色。2025 年 9 月 12 日（周五），一場匯聚全球頂尖專家的行業(yè)技術(shù)交流會 Droplet Digital PCR World 2025 將在線上舉辦。這一會議邀請到多位 CGT 領(lǐng)域?qū)＜?，聚焦細胞基因治療產(chǎn)品開發(fā)、生產(chǎn)和質(zhì)控，共話技術(shù)研究，助力加速 CGT 產(chǎn)品商業(yè)化進程。點擊掃描下圖或文末「閱讀原文」即可參與報名。

來源：醫(yī)麥創(chuàng)新藥