內(nèi)源阿片系統(tǒng)由四個阿片受體成員以及一系列阿片肽組成，廣泛分布在中樞神經(jīng)系統(tǒng)、外周神經(jīng)系統(tǒng)和免疫系統(tǒng)，調(diào)控鎮(zhèn)痛、欣快、獎賞、認(rèn)知、應(yīng)激等信號通路，是臨床用于治療疼痛、焦慮等疾病的重要靶標(biāo)。

阿片受體家族共有四個成員即μOR、δOR、κOR、NOPR，均屬于G蛋白偶聯(lián)受體，主要通過偶聯(lián)下游Gi蛋白發(fā)揮功能。阿片受體不僅會被體內(nèi)產(chǎn)生的阿片肽激活，而且會被外源的阿片類/非阿片類藥物激活，包括嗎啡、芬太尼等藥物。2022年11月10日，中國科學(xué)院上海藥物研究所研究員徐華強/副研究員莊友文團隊聯(lián)合研究員謝欣團隊、教授王明偉團隊，首次報道了嗎啡和芬太尼結(jié)合人源μOR-Gi蛋白信號復(fù)合體的結(jié)構(gòu)，揭示了二者在結(jié)合μ型阿片受體上的關(guān)鍵差異因素（Cell）。

靶向μOR的小分子阿片藥物廣泛用于臨床中至重度的急性疼痛，而它們在強效鎮(zhèn)痛的同時伴隨著耐藥、呼吸抑制、成癮等嚴(yán)重的副作用。為了開發(fā)更低毒副作用的鎮(zhèn)痛類藥物，科研人員將目光聚焦到其他亞型阿片受體的激動劑上，這促進了一些鎮(zhèn)痛藥物的研發(fā)，包括靶向κOR的地佐辛、鹽酸噴他佐辛酯、納布啡癸二酸、氫溴酸依他佐辛等上市藥物，靶向δOR的SRI-22138、BMS986187等臨床在研藥物，靶向NOPR的PPL-138、LY-2940094等臨床在研藥物（源于藥渡數(shù)據(jù)）。相關(guān)研究盡管已有進展，但由于小分子藥物較差的選擇性和藥理活性，引發(fā)了其他副作用——致幻、驚厥、癲癇等，導(dǎo)致其臨床進展受到阻礙、甚至被終止。

人體中的阿片肽不僅是強效鎮(zhèn)痛藥嗎啡等外源阿片藥物的天然模板，而且在機體自身分泌的濃度下不會導(dǎo)致成癮、呼吸抑制等副作用。內(nèi)源性的阿片肽對四種阿片受體具有很高的親和力、激動活性、高度選擇性，這賦予其重要的研發(fā)價值。內(nèi)啡肽是阿片肽眾多成員中的一種多肽神經(jīng)遞質(zhì)，會在身體感到疼痛或者有壓力時被釋放，有助于減輕疼痛、緩解壓力。內(nèi)啡肽也會在按摩、跑步、游泳等鍛煉運動中被釋放，并通過機體的獎賞信號通路來提升人的幸福感。阿片肽由一系列前體蛋白經(jīng)過酶解和修飾得到，包括內(nèi)啡肽、強啡肽、腦啡肽和痛敏肽等。除了內(nèi)源性的阿片肽以外，阿片受體也會被外源的多肽激活，包括食物中的酪啡肽、青蛙皮膚表面的皮啡肽等。

隨著X-射線晶體技術(shù)和冷凍電鏡技術(shù)的發(fā)展，近20年間已有超過800個GPCR相關(guān)的結(jié)構(gòu)被報道（源于GPCRdb）。阿片受體作為一類重要的藥物靶標(biāo)，該家族的失活和激活結(jié)構(gòu)被相繼發(fā)表。在此前的研究中，較多備受關(guān)注的科學(xué)問題得以解釋，包括阿片受體與小分子拮抗劑/激動劑的結(jié)合模式、鈉離子口袋介導(dǎo)的激活機制、μOR的偏向性機制等。然而，內(nèi)源性阿片肽配體如何選擇性識別并激活不同亞型阿片受體的分子機制尚不清楚，阻礙了科學(xué)家對阿片肽的認(rèn)知與合理的設(shè)計改造。

1月12日，上海藥物所徐華強/莊友文團隊聯(lián)合美國北卡羅萊納大學(xué)教堂山分校Bryan L. Roth團隊，以長文形式在《細(xì)胞》（Cell）上，在線發(fā)表了題為Structures of the entire human opioid receptor family的研究論文。該研究系統(tǒng)分析和明確了各內(nèi)源性阿片肽對阿片受體的信號活性，并進一步解析了阿片受體家族四個亞型（μOR、δOR、κOR、NOPR）以及各自的選擇性阿片肽包括內(nèi)啡肽、內(nèi)嗎啡肽、強啡肽、皮啡肽和痛敏肽的冷凍電鏡復(fù)合物結(jié)構(gòu)。同時，該工作結(jié)合大量細(xì)胞水平的功能實驗，揭示了多肽類配體和阿片受體的結(jié)合模式，闡述了它們的選擇性和保守性機制，為“信使-信箱-效能”模式提供了結(jié)構(gòu)和功能支持。

本研究通過細(xì)胞水平的功能實驗，較為系統(tǒng)地分析了阿片肽對野生型阿片受體的的信號傳導(dǎo)特性。由于內(nèi)啡肽和腦啡肽對μOR、δOR的激活程度相近，為了系統(tǒng)地闡述選擇性差異，研究最終鎖定了內(nèi)啡肽以及選擇性更顯著的內(nèi)嗎啡肽、強啡肽、痛敏肽和外源的皮啡肽作為研究對象，分別解析了內(nèi)啡肽-μOR、內(nèi)嗎啡肽-μOR、強啡肽-κOR、痛敏肽-NOPR、皮啡肽-δOR的高分辨率冷凍電鏡三維結(jié)構(gòu)，并利用第二信使cAMP的抑制試驗、G蛋白和arrestin蛋白的招募實驗來分析突變體的特性。

研究發(fā)現(xiàn)，所有的阿片肽均是以N端插入的方式進入受體。阿片肽的N端基序YGGF（痛敏肽是FGGF）“信使”結(jié)合在阿片受體極為保守的正構(gòu)結(jié)合口袋腔室里，第一個酪氨酸/苯丙氨酸主鏈上的胺基均與D3.32Q2.60Y7.43基序形成極性網(wǎng)絡(luò)。該保守腔室對配體的識別和藥理活性必不可少，合成的YGGF四肽便可以通過較弱的作用激活四個受體（EC50約10μM）。結(jié)構(gòu)分析發(fā)現(xiàn)，阿片受體的胞外端，主要為ECL2/3以及TM2/6/7的胞外端在序列和帶電性上均具有差異性，例如κOR和NOPR的ECL2富含帶負(fù)電的氨基酸，對應(yīng)的強啡肽和痛敏肽在ECL2處富含帶正電的氨基酸。大規(guī)模功能突變實驗結(jié)果表明，阿片受體ECL2/3和TM2/6/7的胞外端序列不保守性和帶電差異性共同決定阿片受體對阿片肽的選擇性結(jié)合。

NOPR是阿片受體家族中最后一個被發(fā)現(xiàn)的受體，未被冠以希臘字母名稱。本研究解析的痛敏肽結(jié)合NOPR的結(jié)構(gòu)是首個激活形式NOPR的結(jié)構(gòu)，且通過結(jié)構(gòu)比對分析發(fā)現(xiàn)其遵循阿片受體通用的激活機制。此外，阿片受體對于下游Gi蛋白有著極高的選擇性。本研究發(fā)現(xiàn)阿片受體的ICL3會形成一個短的α螺旋與Gi形成疏水作用，同時保守的精氨酸與Gi形成靜電作用。這可以部分解釋Gi結(jié)合的GPCR結(jié)構(gòu)均含有完整的ICL3，而與其他亞型G蛋白（Gs、Gq）結(jié)合的GPCR結(jié)構(gòu)中往往缺失了ICL3的電子云密度的原因。

綜上，科研團隊通過解析阿片肽結(jié)合的阿片受體結(jié)構(gòu)，闡釋了多肽配體的結(jié)合模式，揭示了阿片受體中保守的結(jié)合口袋以及獨特的ECL2/3共同介導(dǎo)阿片肽的作用機制，剖析了阿片受體通用的激活機制以及對下游Gi蛋白的選擇性特征。上述研究為探索阿片系統(tǒng)的生物學(xué)特性奠定了堅實的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)，并為設(shè)計新型高效的阿片肽類鎮(zhèn)痛藥物鋪平了道路。

研究工作得到國家自然科學(xué)基金、國家重點研發(fā)計劃、上海市科技重大專項、中科院特別助理研究項目，以及美國國立心理健康研究院、美國國立衛(wèi)生研究院等的支持。美國溫安洛研究所科研人員參與研究。

論文鏈接

　　圖為盛開著罌粟花的大腦。罌粟是阿片類鎮(zhèn)痛藥的重要來源。罌粟花上有一只青蛙，表示本研究使用了青蛙皮膚表面的皮啡肽。圖像右側(cè)是四個被激活的阿片受體的結(jié)構(gòu)被嵌在細(xì)胞膜內(nèi)。來自罌粟中的阿片物質(zhì)模擬了人體內(nèi)的阿片肽功能，均通過結(jié)合阿片受體來調(diào)控人體內(nèi)鎮(zhèn)痛、感知、獎賞等生理活動。本研究報道了整個阿片受體家族結(jié)合內(nèi)源性多肽，以及DOR和青蛙皮膚表面的外源皮啡肽的三維結(jié)構(gòu)。

　　圖1.阿片受體結(jié)合阿片肽的功能實驗和冷凍電鏡結(jié)構(gòu)。A、阿片肽誘導(dǎo)阿片受體激活的親和力，B、cAMP抑制曲線結(jié)果，C、Gi招募實驗的曲線結(jié)果，D-H、阿片受體結(jié)合阿片肽的冷凍電鏡結(jié)構(gòu)和原子模型。

圖2.阿片受體和阿片肽的選擇以及“信使-信箱”概念的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。

來源：上海藥物研究所